寧波實驗室裝修PCR實驗室為什么要三區隔離？

寧波實驗室裝修PCR實驗室為什么要三區隔離？

寧波實驗室裝修PCR實驗總是假陽性的，顯然沒有模板，但最終擴展了產品。如果這種現象經常發生，請注意操作環境。

這涉及到氣溶膠的概念。氣溶膠是一種由固體或液體小質點分散并懸浮在氣體介質中的膠體分散系統，可在空氣中停留至少幾個小時。

PCR反應過程中，液體蒸發冷凝，PCR管內部分空氣形成氣溶膠，攜帶大量氣溶膠DNA擴展產品(注意，1ng擴展產品可用作模板DNA片段數，超過1ng可在起始模板中擴展DNA片段數量是數百萬倍甚至更高。例如，人類基因組DNA有30億個bp，要擴展的單拷貝基因片段bp，1ng起始模板可以用作模板DNA片段只占總起始模板DNA總量的千萬分之一)。如果在實驗室打開含量PCR擴大產品管蓋，攜帶大量管蓋DNA氣溶膠擴散到空氣中，從而污染環境。

雖然在整個空間環境中DNA含量很低，但理論上只有一個可以用作模板DNA片段也能PCR擴張成功，這就是為什么在污染環境中陰性對比也可以擴展條帶。所以在專業PCR實驗室(如臨床PCR檢驗實驗室通常需要四個區域的隔離（或至少三個區域的隔離）。常見的三個區域是指：

1.試劑配制區：PCR配制區域的反應系統。

2.標本處理區：包括制備擴展模板，即提取DNA的地方。

3.PCR擴展及產物分析區：PCR擴展區也是凝膠電泳分析擴展產品的區域。

如果將PCR擴展區和產品分析區再次分離，即四區隔離。四區隔離的主要目的是防止氣溶膠在各個區域中PCR區域間流動的最佳方式是每個區域隔一棟樓，但操作不現實，因此有一種方法可以為不同區域設置正負壓：

試劑配制區(Ⅰ區):最干凈的區域，保持微正壓，使外部空氣無法進入隔離污染源。此外，該區域應增加陰性模板PCR嚴禁在此區域打開管并蓋。.存放裝有DNA離心管模板。

DNA模板添加區(Ⅱ區):壓力比Ⅰ區域低，保證內部空氣不泄漏，避免陽性模板氣溶膠污染外部環境。

擴增及PCR產物分析區(Ⅲ區):保持負壓，防止內部空氣泄漏，以免擴大產品的氣溶膠污染外部環境。

壓力遵循Ⅰ區→Ⅱ區→Ⅲ區單向進行，不可逆向進行。

既然PCR三區隔離的目的是阻斷氣溶膠的交流，請注意以下細節，思考氣溶膠的來源：

1.寧波實驗室裝修各區域應配備專用移液器，不得交叉混用。我們的一個用戶在電泳室里加了一個移液器模板，陰性對比擴展了明亮的條帶。

2.各區域應配備專用移液吸頭，不得交叉混用。

3.如果條件允許，在PCRⅢ工作結束后，再次進入PCRI實驗服需要更換.一次性鞋套.帽子.手套。

4.在PCRI區.PCRⅡ區域配吸頭的區域。